Exemples de méthodes classiques d'analyse virologique

Détection virus / antigène viral

Isolement sur cultures cellulaires Un échantillon est inoculé à des cultures cellulaires. Les virus potentiels utilisent les cellules pour se reproduire et produisent un effet cytopathogène (ECP), c.-à-d. qu'ils détruisent les cellules hôtes. Les virus peuvent être identifiés au moyen d'anticorps marqués par une enzyme (coloration rouge).
Test de neutralisation du virus Un échantillon est mélangé à des anticorps spécifiques dans une éprouvette. Ces anticorps neutralisent le virus, ce qui l'empêche d'infecter d'autres cellules.
Détection histologique Des tissus susceptibles d'être infectés par un virus sont coupés en fins morceaux et enduits d'une couche d'anticorps marqués par une enzyme. Les tissus infectés changent de couleur.
Détection d'antigènes viraux par la méthode ELISA Un virus inactivé est prélevé sur un échantillon et mélangé à des anticorps marqués par une enzyme. L'échantillon renfermant le virus change de couleur.
Détection au microscope électronique Cette méthode permet d'observer directement le virus et de l'identifier sur la base de sa structure.
Détection de virus ou d'anticorps au moyen de structures virales spéciales; hémagglutination La surface de certains virus (myxovirus et paramyxovirus) renferme de l'hémagglutinine qui provoque l'agglutination des globules rouges (érythrocytes).
Hémadsorption Au cours du processus de reproduction de myxovirus ou de paramyxovirus, de l'hémagglutinine se forme à la surface des cellules infectées. Si l'on mélange ces cellules infectées à des érythrocytes, ceux-ci demeurent collés à la surface de la cellule.

Détection d'anticorps

Détection d'anticorps viraux par la méthode ELISA Un échantillon sanguin de patient est placé sur une feuille de plastique enduite d'un virus inactivé. A l'aide d'un autre anticorps spécifique marqué par une enzyme et ciblé contre les anticorps du patient, il est possible d'identifier la présence d'anticorps dans l'échantillon sanguin.
Test de séroneutralisation Un échantillon contenant des anticorps est mélangé à des virus spécifiques dans une éprouvette. Ces anticorps neutralisent les virus qui ne peuvent plus infecter d'autres cellules.
Détection par biologie moléculaire Détection de segments génomiques de virus par la méthode PCR en temps réel Un échantillon de sol est dilué dans une éprouvette au moyen d'une solution tampon. Si le pH est élevé, les virus surnagent après centrifugation. Les ARN / ADN viraux peuvent alors être extraits par un robot. Les acides nucléiques extraits sont ensuite identifiés dans un cycler PCR temps-réel, au moyen de sondes ADN spécifiques marquées par immunofluorescence.
Principe de la méthode PCR en temps réel Un segment spécifique des ARN / ADN viraux extraits est répliqué et détecté au moyen de sondes ADN spécifiques (sondes primer & TaqMan) et d'une enzyme (polymérase). La double chaîne d'ADN est dénaturée en deux chaînes individuelles. La sonde primer et la sonde marquée par fluorescence se combinent spécifiquement (annelage) à la chaîne individuelle d'ADN. La sonde renferme deux colorants fluorescents: le désactiveur supprime la fluorescence de l'indicateur. La polymérase reconnaît l'ADN à double chaîne primer et commence à synthétiser la double chaîne complète (extension). La sonde marquée par fluorescence se scinde. L'indicateur jusqu'ici réprimé se dissout dans la solution et produit un degré de fluorescence mesurable. Ce cycle, produit par dénaturation à 95°C pendant 15 s et par extension de l'annelage à 60°C pendant 60 s, est répété 40 fois. Après chaque cycle, l'augmentation d'ADN est mesurée quantitativement et représentée sous forme de diagramme du cycle de fluorescence.